1、李怀恩等观察了臭氧气体对空气中绿脓杆菌的杀灭作用
在15℃，湿度73%，臭氧浓度0.08-0.6ppm时，30分钟内杀灭率达到99.9%以上；伍学洲等试验臭氧对大肠杆菌杀灭率为100%，对金黄色葡萄球菌杀灭率为95.9%，对绿脓杆菌杀灭率为89.8%，顾士圻等试验，臭氧对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌杀灭率分别为99.7%、99.9%。居喜娟等试验用臭氧可杀灭空气中的白色葡萄球菌99.99%；Burleson（国外）等试验将臭氧气体通入染有金黄色葡萄球菌、 大肠杆菌、荧光假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏痢疾杆菌、霍乱弧菌的磷酸盐缓冲液中，作用15秒后，以上细菌全部杀灭；白希尧等发现臭氧水溶液杀菌作用强大，且速度极快，浓度为0.3mg/L的臭氧水溶液作用1分钟，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭率均达100%。
2、臭氧对细菌芽胞
瞿发林等报告，以5.5mg/m3的臭氧作用下45分钟，可将100mL塑料瓶内滴染的枯草杆菌黑色变种芽胞100%杀灭；居喜娟等报道，在1m3试验柜内，开启500mg/h的臭氧发生器60分钟可对空气中的枯草杆菌黑色变种芽胞杀灭率达99.95%；欧阳川等在动态试验条件下，将臭氧气体通入染菌井水中， 臭氧浓度达3.8-4.6mg/L时，作用3-10分钟，水中枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭率达99.999%。
3、臭氧对病毒
李绍忱等试验发现，经10.3mg/m3浓度臭氧作用30分钟后，乙型肝炎表面抗原（HbsAg）的滴度从1:256降至1:64。史江等报告，臭氧浓度13.6mg/m3时使用30分钟，使HbsAg破坏99.99%，使用甲型肝炎病毒抗原（HAAg）破坏100%； 国外Wolo等实验证明0.5ppm的臭氧可灭活空气中的甲型流感病毒99%；Herbold等报告，在20℃水中，臭氧浓度为0.13mg/L时，可以100%的灭活脊髓灰质炎病毒I型（PVI）。臭氧灭活病毒速度极快，当臭氧浓度分别为0.09mg/L-0.8mg/L时，在反应最初5秒钟内，噬菌体T2即可被灭活5-7个对数值。Finch发现水中含臭氧浓度40μg/L时，作用20秒钟，可使大肠杆菌噬菌体ms2灭活4个对数值。Vaughn等在4℃条件下，对比了臭氧对猿轮状病毒SA-H和人轮状病毒2型的灭活效果,发现两种病毒均能被0.25mg/L的臭氧迅速灭活。Crpend等检测了经臭氧处理后的血清中爱滋病毒(HIV)的灭活情况，证明当臭氧浓度为4mg/L时，可将滴度为106CID50/mLHIV全部灭活，病毒滴度下降6个对数值。
4、臭氧对真菌
汪华明等报道,臭氧浓度为9.6mg/L时，作用100分钟对杂色曲霉与桃色拟毒霉的杀灭率达100%，对蜡叶枝孢霉23mg/L30分钟、青黑霉在12.5mg/L作用35分钟、 桔青霉在15.4mg/L作用30分钟，尖镰孢霉在15.5mg/L时作用20分钟，均可达100%灭活率。对于烟曲霉、 细交链孢霉、爪哇毛霉等，在臭氧浓度为3.85-10.7mg/L时作用10-20分钟灭活率达96.4%。伍学洲等发现，臭氧在30分钟内对青霉菌的杀灭率为93.8%，对毛霉菌的杀灭率为100%；白希尧等报告，浓度为15mg/L的臭氧水溶液作用1分钟，可100%地杀灭试验中的黑曲霉和酵母。
5、臭氧对原虫
Finch等比较了22℃时臭氧对兰氏贾弟鞭毛虫和鼠型贾弟鞭毛虫色曩的灭活效果， 当Ct值0.86mg.min/L时，可使鼠型贾弟鞭毛虫减少4个对数值，Ct值为2.5mg.min/L时，使兰氏贾弟鞭毛虫减少4个对数值。Korich等比较了臭氧、二氧化氯、 氯对净化水中的微小隐孢子虫卵囊的灭活作用试验证明，1ppm的臭氧作用5分钟可以灭活90%的卵囊，1.3ppm的二氧化氯则需作用1小时，80ppm的氯则需作用1.5小时才能达到同样效果。
6、臭氧的广谱杀菌原理
以上报告说明，臭氧几乎对所有病菌、病毒、霉菌、真菌及原虫、卵囊都具有明显的灭活效果，且灭菌时间来说，迅速无比，是氯的300-600倍，紫外线的3000倍。臭氧的灭菌机理，Roy等研究报告，臭氧可破坏病毒衣壳蛋白的四条多肽链并使RNA受到损伤；Kim等报告，臭氧作用过程中， 可使噬菌体中RNA被释放，电镜观察可见噬菌体被断裂成小的碎片。还有人认为，臭氧可与细菌细胞壁脂类双键反应，穿入菌体内部，作用于脂蛋白和脂多糖，改变细胞的通透性，从而导致细菌溶解和死亡.臭氧的灭菌速度和效果是无与伦比的，它的高氧化还原电位决定了它对氧化、脱色、除味方面的广泛应用，有人研究指出， 臭氧溶解于水中，几乎能够消杀水中一切对人体有害的物质，比如铁、锰、铬、硫酸盐、酚、苯、氧化物等，还可分解有机物及灭藻等
7、南方医院用注射臭氧治疗椎间盘突出
经皮穿刺椎间盘内注射臭氧，是近年来在欧洲兴起的一种新的治疗方法。第一军医大学附属南方医院最近对100多名深受腰椎病困扰的患者运用了这一疗法，疗效良好。
据介绍，在意、法、德等国，每年均有数千例患者接受经皮穿刺椎间盘内注射臭氧的治疗并取得了很好疗效。南方医院于今年初从意大利引进并在国内率先开展此项技术，手术时，先用CT测量并选准穿刺点，然后将一根长约10公分的针管插入到椎间盘，经针管注入臭氧。
南方医院介入治疗科医生介绍说，臭氧是强烈的氧化剂，作为一种消毒剂及防腐剂已在医疗和生活领域得到广泛应用，它同时具有抗炎、镇痛等作用，特别是对久治不愈的腰椎间盘突出等症， 治疗有效率可达85%以上。“经皮穿刺椎间盘内注射臭氧”手术，具有损伤小、治疗周期短及并发症少等优点。
8、臭氧疗法治疗蛀牙、虫牙
许多牙病患者都有过这样的感觉：牙医手中电钻让人“不寒而栗”。最近，英国的科学家发明了一种臭氧治疗法，也许会让治疗“蛀牙”不再那么痛苦。
通常治疗“蛀牙”方法是，牙科医生先用激光，找出牙齿内部的腐坏部位。然后用钻头在蛀牙上打孔，钻出一条通道。接着用刮、擦等方式将腐坏部位清理干净，最后再用填充物将牙齿的空洞填满。这样不仅费时费力，而且也会给患者带来很大的痛苦。现在的臭氧治疗法就要好得多。医生直接将臭氧气体喷到蛀牙上，这样便可以直接杀死绝大部分导致蛀牙的细菌，还可以有助于牙齿的再生。对于儿童而言，这种新方法还具有预防蛀牙的作用。
据专家介绍，这种臭氧方法只需几秒钟，就能够杀死蛀牙上99%的有害微生物组织。而仪器上装配的吸力帽和恢复装置，也能够保证治疗时不会有气体漏入患者嘴中。在臭氧治疗后，蛀牙已经被清理干净。患者既可以选择加入填充物，也可以不加，都不会有多大影响。
这种臭氧治疗法，不仅治疗效果良好，而且还十分快速。以往在治疗蛀牙时， 光是对一颗牙齿的钻孔、填充就要花上最少半个小时的时间，而臭氧治疗时，喷涂一颗牙只需不到一分钟的时间就能完成。
这个新方法是由英国北爱尔兰的贝尔法斯特皇后大学研究的。 现在，许多牙医已经开始采用这种高效、无痛的臭氧治疗法了。
2002年10月12日《央视国际》
第二军医大学学报 1998年第4期第19卷
9、等离子体-臭氧对空气中微生物的杀灭效果研究
作者：顾春英 薛广波 居喜娟 关键词：等离子体-臭氧；消
提要 目的：探讨急性低氧油酸肺损伤大鼠肺组织中SP-A和SP-B的表达，明确SP-A和SP-B在肺表面活性物质(PS)中的作用，及其对该系统的影响。方法：采用低氧大鼠油酸肺损伤模型及免疫组化技术，采用己酮可可碱对急性肺损伤进行干预。结果：SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为对象 ，SP-B的特异性较SP-A高。肺泡腔和小支气管腔内可见一层免疫阳性物质沉着， 肺泡Ⅱ型上皮细胞多位于肺泡隔部和角部并靠近肺泡腔。己酮可可碱可使SP-A蛋白表达增加。 结论：SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为对象，气道上皮和血管内皮以及间质细胞均未见明显的表达，SP-B的特异性较SP-A高。急性低氧油酸肺损伤时，肺组织SP-A和SP-B免疫组化显示肺泡Ⅱ型上皮细胞的表达明显减弱。 己酮可可碱可使SP-A蛋白表达增加。
急性肺损伤或急性呼吸窘迫综合征的发病机制非常复杂，自1967年Ashbaugh首次报道以来，已经被人们充分认识， 其临床特征主要有三大特点：难以纠正的低氧血症、肺顺应性降低和X线胸片的弥漫性浸润。尽管试用各种药物，从炎症介质入手试图改善ARDS患者的预后，但至今均未获得满意的结果， 其病死率一直维持在50%～70%，充分说明现有的治疗手段存在不足［1］。近年研究表明，外源肺表面活性物质(Pulmonary surfacant,PS)替代治疗对防止ARDS发生或减轻其病情、促进肺功能恢复有显著作用［2，3］。 同样有资料证明ARDS患者存在内源性PS系统的异常［4］。PS各种表面活性指标的异常，其程度与ARDS病情呈线性关系。不同类型的ARDS动物模型在病变早期即有PS的异常变化［5］。由此，ARDS的PS系统功能的异常及其作为肺损伤过程中的重要内在因素，目前已得到公认。为了进一步明确近年发现的表面活性蛋白A(Surfactant protein A,SP-A)和表面活性蛋白B(Surfactant protein B,SP-B)在PS中的作用，及其对PS系统的影响，本实验拟观察急性低氧大鼠油酸肺损伤肺组织中SP-A和SP-B的表达。
1、材料与方法
实验用雄性Wistar大鼠18只，分为正常对照组(对照组)、急性低氧肺损伤组(实验组)和急性低氧肺损伤+己酮可可碱干预组(治疗组)。动物模型的复制：雄性Wistar大鼠，体重(250±30)g， 放入低压仓内，匀速减压至海拔6 000 m，持续12 h。然后从颈外静脉注入油酸复制急性肺损伤模型，并用药物(己酮可可碱)进行处理。试验组、治疗组和对照组各取6只大鼠右下肺膈叶，10%福尔马林固定，待检查。
肺组织SP-A和SP-B免疫组织化学检测［6］。免疫组化用LSAB组合试剂盒，珠海经济特区生化药品公司，广东。
SP-A，SP-B多克隆抗体：美国俄亥俄州儿童医学中心Whitsett教授惠赠。
1.1 标本的制备
常规留取肺组织标本，10%福尔马林液固定，石蜡包埋切片，片厚4μm。置40%甲醛明胶包被载玻片上。
1.2 操作步骤
按试剂盒说明书进行，同时设阴性对照。①二甲苯脱蜡，常规酒精至水， 重新湿化组织切片。②3%H2O2孵育5 min以消除内在过氧化酶反应。③用蒸馏水冲洗，再置Tirs缓冲液浸泡5 min。 ④加入1∶20稀释的正常猪血清(阻断剂)，37°C孵育20 min。⑤擦去载玻片上多余的水分和猪血清。⑥分别加入1∶800稀释的SP-A和SP-B多克隆抗体20 μl，室温孵育30 min。⑦用0.01 mol/L PBS缓冲液冲洗载玻片并浸泡10 min。⑧加1∶400倍稀释的生物素标定的猪抗兔免疫球蛋白(联接剂)，37°C孵育30 min。⑨PBS洗片10 min。10加1∶400倍稀释过氧化物酶标定抗生链菌素(Streptavidin)20 μl,37°C 30 min。重复步骤⑦。11加DAB基质液(DAB 6 mg 10 ml Tris*Cl pH 7.6,0.1 ml 3%H2O2，过滤后使用)10 μl室温孵育10 min。12以蒸馏水冲洗，苏木精-伊红复染。中性树胶封片，光镜观察，照相。
2、结果
结果表明：①实验组和对照组的SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为对象，气道上皮和血管内皮以及间质细胞均未见明显的SP-A和SP-B蛋白的表达。从肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的特异性看， SP-B的特异性较SP-A高。肺泡Ⅱ型上皮细胞，在SP-B抗体处理组较SP-A抗体处理组着色明显，易于辨认，见图1、2。②实验组和对照组的肺泡腔内和小支气管腔内可见一层免疫阳性物质沉着，这种现象以SP-A处理组常见，而在SP-B处理组则不多见。③对照组显示肺泡Ⅱ型上皮细胞多位于肺泡的隔部和角部并靠近肺泡腔。④己酮可可碱治疗组，肺泡腔和小支气管腔中免疫阳性物质明显增加，以SP-A抗体处理组较显著。结果提示己酮可可碱可使SP-A蛋白表达增加，见图3～5。
图1、注射油酸4 h，大鼠肺组织内SP-A表达SP-A阳性物质沿肺泡表面分布，部分肺泡Ⅱ型上皮细胞浆内也可见阳性颗粒
图2、注射油酸4 h，大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-B表达SP-B阳性颗粒位于肺泡Ⅱ型上皮细胞及肺泡表面
图3、己酮可可碱治疗1 h，示大鼠肺组织内SP-A表达明显增强SP-A阳性物质位于肺泡腔表面
图4 己酮可可碱治疗2 h，见肺泡Ⅱ型皮上皮细胞SP-B表达增强，部分肺泡腔也见阳性SP-B阳性物质
3 讨论
本研究结果表明，SP-A和SP-B在肺内的表达主要以肺泡Ⅱ型上皮细胞为主，气道上皮和血管内皮以及间质细胞均未见明显的表达。从肺泡上皮细胞表达的特异性看，SP-B的特异性较SP-A高。可能与SP-A的产生细胞有关，因为除肺泡Ⅱ型上皮细胞外，小支气管的Clara细胞也可分泌SP-A；而SP-B的来源仅仅见于肺泡Ⅱ型上皮细胞，故其特异性较高。因而肺泡腔内和小支气管腔内可见一层免疫阳性物质沉着， 这种现象以SP-A处理组常见，而在SP-B处理组则不多见。 肺泡Ⅱ型上皮细胞多位于肺泡的隔部和角部并靠近肺泡腔。
已经证明，ARDS患者BALF中SP-A和SP-B含量降低，而且有人认为， SP-A含量与ARDS严重程度之间呈负相关，并把SP-A和SP-B含量的减少作为ARDS的敏感标志物［7］。 严重败血症所致的ARDS患者同样检测到SP-A和SP-B含量的减低［7］。本研究结果表明，急性低氧油酸肺损伤时， 肺组织SP-A和SP-B免疫组化肺泡Ⅱ型上皮细胞的表达明显减弱。这种表达的减低可能与肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤、合成SP-A和SP-B的能力下降、加之排泌进入肺泡腔增加有关。所以在急性低氧油酸肺损伤中 ，肺泡腔沿细胞表面分布的免疫阳性物质沉着。而肺泡Ⅱ型上皮细胞着色较淡。至于是否存在肺部的SP-A和SP-B的丢失现象，尚未发现直接证据。不过，已有资料报道，肺泡巨噬细胞可以吞噬并降解SP-A和SP-B。其结果可能导致了肺内SP-A和SP-B表达的降低。
己酮可可碱是黄嘌呤衍生物，晚近报道其对急性肺损伤有一定的保护作用。本研究结果表明， 己酮可可碱治疗组，肺泡腔和小支气管腔中免疫阳性物质明显增加，以SP-A抗体处理组较显著。提示己酮可可碱可使SP-A蛋白表达增加。这种使SP-A表达增加的原因，可能是己酮可可碱治疗急性肺损伤的作用机制之一，己酮可可碱尚可抑制IL1和TNFα激活白细胞、干扰TNF遗传信息翻译而治疗急性肺损伤。
(致谢：西南医院病理科刘丽梅技师，阎晓初副教授给予了大力协助，在此深表谢意。)
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39670336)
作者简介：崔社怀，男，43岁，副主任医师，副教授，博士
参考文献
中国消毒学杂志 1998年第4期第15卷 工作报告
10、医院病区空气霉菌污染及消毒方法的比较
作者：王彩萍 章永川 沈树标 谢忠俭
单位：王彩萍 章永川 沈树标 谢忠俭 （浙江省台州医院，临海 317000）
关键词：霉菌污染；空气污染；空气消毒；过氧乙酸；臭氧
提要：南方海洋性气候医院病区春、夏、秋、冬季室内空气中霉菌数分别平均为1191.4、435.8、525.4、1154.6 cfu/m3。0.2% 过氧乙酸按1000 ml/m2用量拖地作用0.5 h，可使霉菌数由472 cfu/m3减至0 cfu/m3。1.8 mg/m3臭氧作用2 h，仅可使之由419 cfu/m3减至105 cfu/m3。
1994年，对本医院病区消毒前后空气中霉菌进行了检测。现将结果报告如下。
1、方法
1.1 消毒方法
每天用0.2% 过氧乙酸溶液拖地，消毒液用量平均为1000 ml/m2。拖地后关闭门窗让过氧乙酸自然挥发熏蒸作用0.5 h。或开启电子灭菌器产生臭氧消毒2 h。昆开启至1 h时， 室内空气中臭氧升至1.8 mg/m2, 此后浓度无明显变化。
1.2 空气霉菌污染检测
于消毒前与消毒后不同时间，在室内四周与中央布放含0.5% 硫代硫酸钠(中和剂)的高盐察氏培养基平板，以沉降法采样5 min。培养，计数菌落数。按《真菌鉴定手册》(魏景超. 上海：上海科学技术出版社，1979:9)方法作霉菌鉴定。
2、结果
2.1 不同季节病区空气霉菌污染情况
本地在3、6、9、12月时室温分别平均为12.8、24.9、23.2、8.2℃， 相对湿度分别为81%、80%、76%、71%。以其代表春、夏、秋、冬四季。在病区对未消毒空气采样检测结果，春、冬季霉菌数明显多于夏、秋季者(表1)，差异显著(P<0.01)。
表1 不同季节病区空气中霉菌检测结果
霉菌 各月空气中平均霉菌数(cfu/m3)
3月 6月 9月 12月
青霉 464.7 366.5 316.0 558.7
曲霉 31.7 30.1 43.6 1.0
毛霉 2.9 5.2 3.9 18.0
芽枝霉 88.8 19.6 19.4 25.2
根霉 576.7 3.6 52.1 418.5
地霉 0.0 0.0 71.1 108.7
镰刀霉 0.4 2.0 13.4 19.6
素霉 26.2 8.8 5.9 4.9
合计 1191.4 435.8 525.4 1154.6
注： 结果为8次检测平均值。
2.2 两种方法的消毒效果
于夏季消毒前后对空气采样检测，消毒后室内空气中霉菌数明显减少，且过氧乙酸的消毒效果优于臭氧者(表2)，两种方法差异显著(P<0.05)。
表2 两种方法消毒室内空气效果的比较
方法 消毒前霉菌数
(cfu/m3) 消毒后不同时间(h)霉菌数(cfu/m3)
0.5 1.0 2.0 6.0 12.0
0.2%过氧乙酸拖地后熏蒸0.5h 472 0 0 14 30 38
1.8mg/m3臭氧熏蒸2h 419 105 110 131 203 382
3、讨论
3.1 检测春、冬季病区空气中霉菌数明显多于夏、秋季者。此可能与南方海洋性气候有关。 本地区春天早至，温度渐升且多阴雨绵绵，适宜霉菌生长繁殖；夏、秋季因门窗常开， 室内外空气对流好，室内空气中霉菌有所下降；冬季低温时间不长，湿度却较高，且人员多室内活动， 门窗密闭，通风条件差，空气污浊，有利于空气中霉菌量上升。
3.2 0.2% 过氧乙酸按1 000 ml/m2用量拖地后，密闭熏蒸0.5 h，可将霉菌数由472 cfu/m3减至0 cfu/m3, 并在12 h内维持≤38 cfu/m3。1.8 cfu/m3臭氧作用2 h，霉菌数由419 cfu/m3仅减至105 cfu/m3，但因其操作简便，宜增加臭氧浓度以提高其消毒效果。
（1996-09-06收稿 1998-04-07修回） |
